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人胰腺成纖維細胞
Human primary pancreatic fibroblasts
獲取鑒定，請聯(lián)系客服
貨號SD-16759
規(guī)格
推薦培養(yǎng)基 原代成纖維細胞培養(yǎng)體系
產(chǎn)品推薦
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細胞詳述
胰腺為人體內(nèi)僅次于肝臟的第二大腺體，是內(nèi)外分泌混合腺。
胰腺表面覆蓋有薄層疏松結(jié)締組織，并深入腺實質(zhì)，這些結(jié)締組織主要由成纖維細胞構(gòu)成。
細胞特性
1） 細胞來源于人手術(shù)胰腺組織。
2） 細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性。
3） 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5） 細胞生長方式：長梭形，貼壁培養(yǎng)。
產(chǎn)品的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1) 1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2) T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
二、操作流程：
復(fù)蘇
1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；
2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的完全培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；
3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率；
4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；
5) 準備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 完全培養(yǎng)基；
6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 完全培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入 CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。
注意：從液氮中取出細胞凍存管時，若凍存管內(nèi)有液氮進入，需擰松凍存管，排出內(nèi)部殘留的液氮，之后擰緊凍存管，置于干冰上，然后放入 37℃水浴中，避免溫差太大造成液氮快速氣化而爆炸。
傳代 （細胞傳代建議一傳二）
1) 當(dāng)細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。
2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；
3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使 PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；
4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO?培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；
5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的完全培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；
注：如還有部分細胞未消化下來，可采用分步消化：
① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的完全培養(yǎng)基；
② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打）；
③ 向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 胰酶繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫落后加入 2ml 含 10%FBS 的完全培養(yǎng)基中和，中和后的細胞懸液移入①中的離心管內(nèi)。
6) 1000rpm 離心 5min；
7) 準備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml 完全培養(yǎng)基。
8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 完全培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；
9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO?培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）
1）~6）參照傳代步驟
7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；
8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；
9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。
產(chǎn)品使用
1) 本產(chǎn)品僅能用于科研
2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核
3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核
