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間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導分化試劑盒
獲取鑒定，請聯(lián)系客服
貨號SD-16622
規(guī)格
產(chǎn)品推薦
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本產(chǎn)品為精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導分化試劑盒，可增強間充質(zhì)干細胞向成軟骨細胞分化的能力。
本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。
產(chǎn)品組成成分及保存
|
試劑名稱 |
體積 |
保存條件 |
有效期 |
|
地塞米松 |
20μL |
-20℃ |
1 Year |
|
脯氨酸 |
200μL |
-20℃ |
1 Year |
|
抗壞血酸 |
600μL |
-20℃ |
1 Year |
|
TGF-β1 |
2mL |
-20℃ |
1 Year |
|
丙酮酸鈉 |
2mL |
-20℃ |
1 Year |
|
ITS 添加物 |
2mL |
-20℃ |
1 Year |
|
雙抗 |
2mL |
-20℃ |
1 Year |
|
胎牛血清 |
20mL |
-20℃ |
1 Year |
|
基礎培養(yǎng)基 |
200mL |
2-8℃ |
1 Year |
|
甲苯胺藍染色液 |
5mL |
RT（室溫） |
1 Year |
? 注意：
1.為保證產(chǎn)品的有效性，請避免反復凍融。
2.現(xiàn)用現(xiàn)配，配制好的預混液保存于2-8℃，有效期1 month;配制好的完全培養(yǎng)基保存于2-8℃，有效期12 hours.
產(chǎn)品使用說明
1. 成軟骨誘導分化完全培養(yǎng)基的配制
①室溫條件下融化各因子及血清。各因子融化后，瞬時離心，使溶液集中于離心管底部。
（注意：若因子或血清中有沉淀物，屬正?，F(xiàn)象，無須過濾，避免成分丟失。）
②根據(jù)實驗用量，于無菌操作臺中配制誘導分化完全培養(yǎng)基，建議每次配制50mL，配制比例見下表：
|
試劑成分 |
配制比例 |
50mL配制體系 |
|
地塞米松 |
0.01% |
5μL |
|
脯氨酸 |
0.1% |
50μL |
|
抗壞血酸 |
0.3% |
150μL |
|
TGF-β1 |
1% |
500μL |
|
丙酮酸鈉 |
1% |
500μL |
|
ITS 添加物 |
1% |
500μL |
|
雙抗 |
1% |
500μL |
|
胎牛血清 |
10% |
5mL |
|
基礎培養(yǎng)基 |
補充至所需體積 |
補充至總體積為50mL |
2. 成軟骨誘導分化實驗步驟
①建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細胞，將其消化下來，離心收集，使用間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度為1~5×105個cell/mL，均勻鋪于6孔板中，每孔2mL，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
（注意：此處細胞密度及培養(yǎng)液體積以6孔板為例，若為其它培養(yǎng)器皿，請根據(jù)實際情況調(diào)整細胞密度及培養(yǎng)液體積。）
②待細胞匯合度達80%~100%時，即可進行誘導分化。
③小心吸棄細胞培養(yǎng)上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導分化完全培養(yǎng)基，每孔2mL，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
（注意：完全培養(yǎng)基加入細胞前需提前置于37℃預熱。）
③每2day換用新鮮的誘導分化完全培養(yǎng)基。換液時，若細胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色，是由于細胞量較大，培養(yǎng)基消耗較快導致的，請及時調(diào)整為每日換液。
（注意：完全培養(yǎng)基加入前需提前置于37℃預熱。）
④細胞誘導3周后，即可進行甲苯胺藍染色鑒定。
3. 甲苯胺藍染色分析
①細胞誘導分化結(jié)束后，小心吸棄細胞培養(yǎng)上清，1×PBS潤洗1~2次。每孔加入1mL細胞固定液（4%中性甲醛溶液等），室溫固定30 min。
②吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入甲苯胺藍染色液，每孔1mL，室溫染色30min。
（注意：染色液底部可能會有沉淀，吸取時盡量不要觸及底部。若染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果，背景呈淡藍色，成軟骨細胞呈紫紅色。
（注意：染色液可重復使用，建議收集。）
質(zhì)量控制
ü 無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）
ü pH測試
ü 滲透壓檢測
ü 內(nèi)毒素
