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間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒
獲取鑒定，請聯(lián)系客服
貨號SD-16621
規(guī)格
產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品為賽德斯團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒，可增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞向成脂細(xì)胞分化的能力。
本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。
產(chǎn)品組成成分及保存
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試劑名稱 |
體積（200mL體系/100mL體系） |
保存條件及有效期 |
|
誘導(dǎo)分化添加劑Ⅰ |
10mL / 5mL |
-20℃，1 Year |
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誘導(dǎo)分化添加劑Ⅱ |
0.2mL / 0.1mL |
-20℃，1 Year |
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優(yōu)質(zhì)胎牛血清 |
20mL / 10mL |
-20℃，1 Year |
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細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 |
170mL / 85mL |
-20℃，1 Year |
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油紅O染色液 |
10mL /5mL |
4℃避光，1 Year |
注意：1.為保證產(chǎn)品的有效性，請避免反復(fù)凍融。
2.配制好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基保存于2-8℃，有效期為2周，請根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量合理配制。
產(chǎn)品使用說明
1. 成誘脂導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基的配制
①室溫條件下融化添加劑及血清。（注意：若添加劑或血清中有沉淀物，屬正?，F(xiàn)象，無須過濾，避免成分丟失。）
②根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量，于無菌操作臺中配制誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，建議每次配制50mL，配制比例見表一。
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試劑成分 |
配制比例 |
50mL配制體系 |
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誘導(dǎo)分化添加劑Ⅰ |
5% |
2.5mL |
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誘導(dǎo)分化添加劑Ⅱ |
0.1% |
50uL |
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優(yōu)質(zhì)胎牛血清 |
10% |
5mL |
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細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 |
85% |
42.5mL |
表一
2. 成脂誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)步驟
①建議取第3~5代、純度達(dá)90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細(xì)胞，將其消化下來，離心收集，使用含10%FBS的完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度，均勻鋪于培養(yǎng)瓶/板中，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（接種細(xì)胞量與接種面積按照1×105cell/cm2計(jì)算，可參考表二）
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培養(yǎng)器皿 |
底面積 |
細(xì)胞量 |
培養(yǎng)液體積 |
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24孔培養(yǎng)板 |
2cm/孔 |
2×10^5cell/孔 |
1mL/孔 |
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12孔培養(yǎng)板 |
4.5cm/孔 |
4.5×10^5cell/孔 |
2mL/孔 |
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6孔培養(yǎng)板 |
9.6cm/孔 |
9.6×10^5cell/孔 |
2mL/孔 |
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T25培養(yǎng)瓶 |
25cm |
25×10^5cell |
5mL |
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6cm培養(yǎng)皿 |
21cm |
21×10^5cell |
5mL |
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10cm培養(yǎng)皿 |
55cm |
55×10^5cell |
10mL |
表二
②待細(xì)胞匯合度達(dá)80%~100%時(shí)，即可進(jìn)行誘導(dǎo)分化。
③小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注意：完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞前需提前置于37℃預(yù)熱。）
④每2day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。換液時(shí)，若細(xì)胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色，是由于細(xì)胞量較大，培養(yǎng)基消耗較快導(dǎo)致的，請及時(shí)調(diào)整為每日換液。（注意：完全培養(yǎng)基加入前需提前置于37℃預(yù)熱。）
⑤細(xì)胞誘導(dǎo)3周后，即可進(jìn)行油紅O染色鑒定。
3. 油紅染色分析
①細(xì)胞誘導(dǎo)分化結(jié)束后，小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，1×PBS潤洗1~2次。加入適量細(xì)胞固定液，室溫固定30 min。（細(xì)胞固定液為4%中性甲醛溶液等，體積參考表二）
②配制油紅O工作液：油紅O貯存液與蒸餾水按照3：2配制，（例：油紅O貯存液3mL，蒸餾水2mL），混勻。使用濾紙過濾，收集濾液，即為油紅O工作液。（注意：成脂細(xì)胞內(nèi)的油滴極易脫落，操作時(shí)須謹(jǐn)慎。）
③細(xì)胞固定完成后，吸棄細(xì)胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入油紅O染色液，每孔1mL，室溫染色30min。（注意：油紅O工作液底部可能會有沉淀，吸取時(shí)盡量不要觸及底部。若細(xì)胞染色后有沉淀，PBS洗去即可。）
④吸出染色液，PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細(xì)胞染色效果。細(xì)胞內(nèi)油滴著色，呈紅色。（注意：油紅O工作液不可重復(fù)使用，不建議回收。）
圖片僅供參考
質(zhì)量控制
.無菌檢測（細(xì)菌、真菌和支原體檢測）
. pH測試
. 滲透壓檢測
.內(nèi)毒素
