種屬: 人源(Homo sapiens)
組織來(lái)源: 骨髓(Bone marrow)
疾病: 彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma)
年齡: 62歲(62 years)
性別: 男(Male)
細(xì)胞類(lèi)型: 單核細(xì)胞(Monocyte)
生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)(Suspension)
拆包 & 存儲(chǔ)
1. 請(qǐng)立即檢查包裝袋是否有破損或漏液
2. 請(qǐng)立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出,并按照下方操作步驟進(jìn)行培養(yǎng)傳代
注意:如為凍存管,請(qǐng)收到后立即解凍培養(yǎng)。若來(lái)不及解凍,請(qǐng)儲(chǔ)存于液氮中(存儲(chǔ)于負(fù)80度,會(huì)降低細(xì)胞存活率)
培養(yǎng)基:該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為 RPMI1640,配置完全培養(yǎng)基時(shí)需加入10%FBS,1%Anti-Anti。
培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟
對(duì)于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,寄送前,我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿(mǎn)整個(gè)培 養(yǎng)瓶,以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中細(xì)胞所受震蕩。
1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后,請(qǐng)注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置 顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。
2. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于37℃培養(yǎng)箱中直至溫度平衡,隨后,在生 物安全柜中,轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中,離心200×g / 5 - 10 min,去除上清后,用5mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞。
3. 對(duì)上述細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力檢測(cè),調(diào)整細(xì)胞密度至 2- 。
4. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5% CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如 果細(xì)胞達(dá)到傳代培養(yǎng)的密度,則進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
凍存細(xì)胞操作步驟
1.將凍存管置于37℃ 水浴中來(lái)回晃動(dòng),迅速解凍。為避免污染,確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速,大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后,立即取出,采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開(kāi)始,后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中, 離心
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率,請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。
5. 將細(xì)胞置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
懸浮細(xì)胞傳代培養(yǎng)
懸浮細(xì)胞的傳代可通過(guò)補(bǔ)加或置換新鮮培養(yǎng)基的方式來(lái)完成,
具體做法如下:
1. 取出少量細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力檢測(cè),當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到×10^6cells/mL 時(shí),進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2. 取足量細(xì)胞加入到盛有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中,將細(xì)胞密度維持在 ×10^5cells/mL。
3. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5%
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
注意:培養(yǎng)瓶應(yīng)使用帶濾膜瓶蓋,以保持培養(yǎng)基中的空氣和CO2.
懸浮細(xì)胞傳代培養(yǎng)懸浮細(xì)胞的傳代可通過(guò)補(bǔ)加或置換新鮮培養(yǎng)基的方式來(lái)完成,具體做法如下:
1. 取出少量細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力檢測(cè),當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到×10^6cells/mL 時(shí),進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2. 取足量細(xì)胞加入到盛有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中,將細(xì)胞密度維持在 ×10^5cells/mL。
3. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如 果細(xì)胞達(dá)到傳代培養(yǎng)的密度,則進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
注意:培養(yǎng)瓶應(yīng)使用帶濾膜瓶蓋,以保持培養(yǎng)基中的空氣和CO2