大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞

　　一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介

　　1. 產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞

　　2. 組織來(lái)源：骨骼肌組織

　　3. 產(chǎn)品規(guī)格：5×10?/T25培養(yǎng)瓶

　　4. 細(xì)胞簡(jiǎn)介：

　　大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱(chēng)橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張，進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。

　　肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點(diǎn)、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）。

　　明帶染色較淺，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線(xiàn)稱(chēng)H線(xiàn)。H線(xiàn)的中部有一M線(xiàn)。明帶中間，有一條較暗的線(xiàn)稱(chēng)為Z線(xiàn)。兩個(gè)Z線(xiàn)之間的區(qū)段，叫做一個(gè)肌節(jié)。肌衛(wèi)星細(xì)胞指骨骼肌中除骨骼肌纖維（肌細(xì)胞）外的一種扁平、有突起的細(xì)胞。著于肌纖維（肌細(xì)胞）表面；當(dāng)肌纖維（肌細(xì)胞）受損后，肌衛(wèi)星細(xì)胞可增殖分化，參與肌纖維（肌細(xì)胞）的修復(fù)，因此具有干細(xì)胞性質(zhì)。

　　5. 方法簡(jiǎn)介：

　　實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞采用胰蛋白酶膠原酶混合消化法結(jié)合多次差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?/T25培養(yǎng)瓶。

　　6. 質(zhì)量檢測(cè)：

　　實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞經(jīng)Desmin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

　　7. 培養(yǎng)信息：

　　包被條件： PLL（0.1mg/ml）

　　培養(yǎng)基： 推薦使用原代骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)體系及正確的操作方法進(jìn)行培養(yǎng)，可維持細(xì)胞最近生長(zhǎng)狀態(tài)。

　　換液頻率： 每2-3天換液一次

　　生長(zhǎng)特性： 貼壁

　　細(xì)胞形態(tài)： 成纖維細(xì)胞樣

　　傳代特性： 可傳3-5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)最佳

　　傳代比例： 1:2

　　消化液： 0.25%胰蛋白酶培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

　　大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

　　使用方法

　　大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣，在技術(shù)部標(biāo) 準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳3-5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)最佳；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)?？蛻?hù)收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

　　1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

　　2. 貼壁細(xì)胞消化

　　1）吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

　　2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；

　　3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

　　4）待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

　　3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

　　因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴(lài)氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。

　　注意事項(xiàng)

　　1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

　　2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據(jù)。

　　3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶(hù)收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

　　4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

　　5.客戶(hù)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，有任何技術(shù)問(wèn)題，我們隨時(shí)給予解答。