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  雞卵泡基膜細胞

  一、產(chǎn)品簡介

  1. 產(chǎn)品名稱:雞卵泡基膜細胞

  2. 組織來源:雞卵泡組織

  3. 產(chǎn)品規(guī)格:1×10?/T25細胞培養(yǎng)瓶

  4. 細胞簡介:

  雞卵泡基膜細胞分離自雞卵泡組織;成熟卵泡是卵巢的組織結(jié)構(gòu)成分之一,卵泡腔很大,卵丘很明顯。卵泡內(nèi)膜細胞緊靠卵泡顆粒層,與顆粒層細胞之間有一層基膜相隔,內(nèi)膜細胞呈多邊形,胞質(zhì)清亮,胞核圓形,細胞間可見許多毛細血管,外膜細胞位于最外層,多呈梭形,與周圍結(jié)締組織分界不明顯。

  卵泡(follicle)中卵母細胞四周有一層菱形或扁平細胞圍繞,在卵泡開始發(fā)育、卵細胞成長的同時,周圍的菱形細胞變?yōu)榱⒎叫危⒂蓡螌釉錾蓮蛯?,因其細胞漿內(nèi)含有顆粒,故稱為顆粒細胞。

  初級卵泡的顆粒細胞為單層;次級卵泡的顆粒細胞增至復層;成熟卵泡的顆粒細胞展開又變?yōu)閱螌?。顆粒細胞的胞核大而圓,著色深,細胞的游離面有許多細長突起伸入放射帶的凹陷部。

  5. 方法簡介:

  實驗室分離的雞卵泡基膜細胞采用先機械分離后膠原酶反復消化法、并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為1×10?/瓶。

  6. 質(zhì)量檢測:

  實驗室分離的雞卵泡基膜細胞經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

  7. 培養(yǎng)信息:

  培養(yǎng)基: 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

  換液頻率: 每2-3天換液一次

  生長特性: 貼壁

  細胞形態(tài): 成纖維細胞樣

  傳代特性: 可傳2-3代

  傳代比例: 1:2

  消化液: 0.25%胰蛋白酶

  培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;CO2,5%

  雞卵泡基膜細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

  二、使用方法

  雞卵泡基膜細胞是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣,在德爾夫技術(shù)部標準操作流程下,細胞可傳2-3代;建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗??蛻羰盏郊毎?,請按照以下方法進行操作。

  1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

  2. 貼壁細胞消化

  1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;

  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化;

  3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

  4)待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

  3. 細胞實驗

  因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

  四、注意事項

  1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

  2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。

  3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

  4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

  5. 該細胞只可用于科研。

  6. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

  7. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。