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Hi-five昆蟲(chóng)細(xì)胞
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貨號(hào)SD-14541
規(guī)格
推薦培養(yǎng)基 Hi-five昆蟲(chóng)細(xì)胞 專用完全培養(yǎng)基
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Hi-five昆蟲(chóng)細(xì)胞
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞貨號(hào)：wanwu-191
細(xì)胞種屬：粉紋夜蛾
生長(zhǎng)情況：半貼壁
培養(yǎng)條件：Grace’s Insect Medium+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境：air, 100%；28℃
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期：2-3天
培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）
傳代方法
1. 輕輕吸走培養(yǎng)上清，留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面吹下細(xì)胞；
2. 混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；
3. 加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
4. 補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項(xiàng)
半貼壁細(xì)胞會(huì)附著瓶底，但貼壁不緊，輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面就會(huì)脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細(xì)胞操作，吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格：200-300萬(wàn)/ml，1ml每管
凍存方法
1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
4.注意事項(xiàng)：凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
收貨處理方式
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發(fā)貨形式 |
T25瓶 |
凍存管 |
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1 |
快遞保存溫度 |
室溫 |
液氮長(zhǎng)期保存或-80度3天以內(nèi) |
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2 |
初步平衡 |
T25瓶表面消毒后，放28度培養(yǎng)箱平衡復(fù)溫2h以上 |
無(wú)須平衡，直接放入-80冰箱或者液氮罐保存 |
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3 |
處理方式 |
吸走大部分培養(yǎng)基，留10-12ml培養(yǎng)基，拍照并觀察細(xì)胞。密度80%以上即可吸走培養(yǎng)基消化傳代，若密度低于80%可以留10-12 ml繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞密度80%以上 |
37度水浴搖晃盡快融化細(xì)胞，直接在凍存管內(nèi)將細(xì)胞離心。離心轉(zhuǎn)速以離心力150g(約900rpm)左右，1min為宜，棄上清，沉淀用新鮮培養(yǎng)基重懸后接種到10cm培養(yǎng)皿，顯微鏡下觀察細(xì)胞并拍照，24h后換液一次 |
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4 |
接種方式 |
T25傳代首次建議1:2傳代，即瓶T25傳成兩瓶 |
一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
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5 |
注意事項(xiàng) |
若細(xì)胞出現(xiàn)漂浮，T25瓶不開(kāi)封，放至28度培養(yǎng)箱過(guò)夜，若細(xì)胞貼壁即說(shuō)明活性正常，按正常操作消化傳代即可；若未貼壁，收集細(xì)胞培養(yǎng)基離心后，將細(xì)胞重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中，同時(shí)原瓶還貼壁的細(xì)胞加培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng) 發(fā)貨T25瓶裝滿大約有75ml培養(yǎng)基，可以收集起來(lái)，1500rpm離心5min后，取上清4度保存，用于培養(yǎng)細(xì)胞，以平穩(wěn)過(guò)渡到客戶自己的培養(yǎng)基 |
收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存，以上情況及時(shí)反饋 干冰發(fā)貨的細(xì)胞只能在-80保存3天左右，長(zhǎng)時(shí)間保存會(huì)出現(xiàn)活性下降。干冰發(fā)貨均為兩支，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶同時(shí)復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方將不提供免費(fèi)售后服務(wù)
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Tips：
1. 細(xì)胞半貼壁圓形或多角形生長(zhǎng)，部分懸浮圓形，傳代時(shí)均可收集培養(yǎng)，換液時(shí)將懸浮細(xì)胞離心收集后重新接回原瓶，若貼壁細(xì)胞較多活性較好時(shí)可以不要懸浮的細(xì)胞；
2. 該細(xì)胞對(duì)胰酶比較敏感，胰酶消化后細(xì)胞形態(tài)會(huì)更多梭形，貼壁變緊，傳代不建議使用胰酶消化該細(xì)胞；
3. 該細(xì)胞28度培養(yǎng)，建議27.5-28度之間，超過(guò)28度細(xì)胞狀態(tài)會(huì)受損無(wú)法恢復(fù)，低于27度細(xì)胞生長(zhǎng)速度會(huì)變慢，但恢復(fù)溫度后可以恢復(fù)生長(zhǎng)。
