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NCI-H660 人神經(jīng)內(nèi)分泌前列腺癌細(xì)胞
Human Neuroendocrine Prostate Cancer Cells ,NCI-H660
獲取鑒定，請聯(lián)系客服
貨號SD-10386
規(guī)格
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產(chǎn)品描述
種屬: 人源（Homo sapiens）
組織來源: 前列腺（Prostate）
疾病: 癌癥（Carcinoma）
年齡: 63歲（63 years）
性別: 男（Male）
細(xì)胞類型: 表皮細(xì)胞（Epithelial）
生長特性: 懸浮/輕微貼壁（Floating with some attached）
拆包 & 存儲
1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液
2. 請立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn)行培養(yǎng)傳代
注意：如為凍存管，請收到后立即解凍培養(yǎng)。若來不及解凍，請儲存于液氮中（存儲于負(fù)80度，會降低細(xì)胞存活率）
培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟
對于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會將運輸培養(yǎng)基（收到后請使用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)）充滿整個培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運輸過程中貼壁細(xì)胞的脫落。
1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。因在運輸過程中存在顛簸，且有些細(xì)胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些
細(xì)胞脫落漂浮的情況，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
2. 對于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8mL左右，隨后將細(xì)胞置于含有5%CO?的37℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細(xì)胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶，請立即傳代。
3. 對于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有5%CO?的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。
凍存細(xì)胞操作步驟
注意：為保存細(xì)胞的高存活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。
1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染， 確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 離心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。
5. 將細(xì)胞置于含有5%CO?的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)
1. 用移液管吹打貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到離心管中離心收集懸浮細(xì)胞。
2. 培養(yǎng)瓶中剩余少量貼壁細(xì)胞，加入適量PBS洗滌一次。隨后加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm2 培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實際情況增減用量。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
4. 離心200x g/5 min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸, 取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細(xì)胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。
5. 將細(xì)胞置于含有5%CO?的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
傳代比例：建議 1:2 至 1:3（以培養(yǎng)瓶底面積計算）
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天
完全培養(yǎng)基配制
該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為RPMI1640,配置完全培養(yǎng)基時需加入10 nM beta-estradiol，10 nM Hydrocortisone，1*ITS(Insulin-Transferrin-Selenium), 5%FBS, 1%Anti-Anti。
使用范圍：本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。
