中文名稱：人中性粒細(xì)胞

英文名稱：Human Neutrophils

預(yù)期用途：可作為多種領(lǐng)域研究所需的原材料。

貯藏條件與有效期

置于液氮保存，有效期為 24 個(gè)月；

生產(chǎn)日期，有效期至：見(jiàn)標(biāo)簽。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

中性粒細(xì)胞占外周血白細(xì)胞總數(shù)的 50%-70%，是人體含量最豐富的免疫細(xì)胞。中性粒細(xì)胞來(lái)源于骨髓，內(nèi)含過(guò)氧化酶、溶菌酶、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類，具有趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。中性粒細(xì)胞是免疫學(xué)領(lǐng)域，感染性疾病領(lǐng)域，惡性血液疾病等領(lǐng)域?qū)W者經(jīng)常需要的研究原材料。

操作步驟

所需試劑：

1 IMDM，α-MEM 或 RPMI-1640

2 FBS

3 DNase I

操作流程：

1 準(zhǔn)備好 37°C 水浴，將 RPMI-1640 與 FBS 溫浴至 37°C；

2 生物安全柜中，配制含 10%FBS 的培養(yǎng)基（IMDM, α-MEM 或 RPMI-1640 均可），待用；

3 從液氮中取出中性粒細(xì)胞凍存管，置于-80°C 超低溫冰箱中數(shù)分鐘，使凍存管中的液氮揮發(fā)， 而后迅速將其置于 37°C 溫水中，并快速水平晃動(dòng)，使其內(nèi)含物盡快融化，直至凍存管固體內(nèi)含物余下一小冰屑后取出凍存管；

注意：

1）從液氮中取出凍存管時(shí)，往往在凍存管里含有液氮，最好先將凍存管先置于超低溫冰箱中， 使液氮揮發(fā)，再進(jìn)行水浴化凍的操作；

2）盡可能將凍存管的內(nèi)含物全部浸沒(méi)于 37°C 溫水中，使內(nèi)含物均勻融化；

3) 請(qǐng)勿使溫水沒(méi)過(guò)凍存管蓋的螺口，以防污染；

4) 細(xì)胞復(fù)蘇的操作過(guò)程要迅速，避免影響細(xì)胞復(fù)蘇后的活性。

4 在將凍存管拿進(jìn)生物安全柜之前，用 75%酒精對(duì)其表面進(jìn)行消毒；

5 輕輕重懸細(xì)胞，并將其移入裝有 300μg DNase I 的 50mL 離心管里；

注意：

1）加入 DNase I 可有效減少中性粒細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞團(tuán)塊的產(chǎn)生；

2）DNase I 的使用是非必須的，對(duì)于 DNA, RNA 等的提取目的可不使用。

6 用 1mL 培養(yǎng)基沖洗凍存管，并將此懸液以 3-5s 每滴的速度滴加到 50mL 離心管中，并且同時(shí)輕輕搖晃離心管，使滴加的懸液混勻；

7 吸取 15-20mL 的培養(yǎng)基以 3-5s 每滴的速度滴加到 50mL 離心管中，并且同時(shí)輕輕搖晃離心管，使滴加的懸液混勻；

注意：第 5,6,7 步驟可使中性粒細(xì)胞中的 DMSO 緩慢均勻的滲透出來(lái)，最大程度保證細(xì)胞安全，但操作較為緩慢，若有多個(gè)樣品需要處理時(shí)，可以將操作步驟更改為：

5’：輕輕重懸細(xì)胞，并將其移入裝有 300μg DNase I 的 15mL 離心管里；

6’：用 1mL 培養(yǎng)基沖洗凍存管，并將此懸液合并到到 15mL 離心管里；

7’：吸取 10mL 培養(yǎng)基，直接加入到 15mL 離心管中，反復(fù)輕柔吹打或上下顛倒混勻，室溫孵育 10min；

8 室溫下，300g 離心 10min；

9 迅速使用移液槍吸走上清，剩余少許液體，并輕輕吹打液體使 PBMC 懸??；

注意：

1）離心結(jié)束后，盡快吸走上清；

2) 吹打液體時(shí)動(dòng)作要輕，避免損傷細(xì)胞，并且吹打時(shí)盡可能避免氣泡產(chǎn)生。

10 緩慢加入 15-20mL 新鮮培養(yǎng)基，并同時(shí)輕輕搖晃離心管；

11 室溫下，300g 離心 10min；

12 迅速使用移液槍吸走上清，剩余少許液體，并輕輕吹打液體使細(xì)胞懸浮，此中性粒細(xì)胞即可用于下游實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品性能指標(biāo)

產(chǎn)品性能符合本企業(yè)制定的產(chǎn)品技術(shù)要求。