在線留言
在線客服
24小時服務熱線：18225607483
方經(jīng)理：355185756
方經(jīng)理：18225607483
楊經(jīng)理：15156810450
夏經(jīng)理：15395124213
DF-1(雞胚成纖維細胞)
獲取鑒定，請聯(lián)系客服
貨號SD-17786
規(guī)格
產(chǎn)品推薦
-
立即咨詢 -
立即咨詢
-
立即咨詢
-
立即咨詢
細胞介紹
該細胞是起源于 10 日齡的 ELL-0 雞蛋的雞細胞株，自發(fā)永生化。分離原代雞胚成纖維細胞并在培養(yǎng)液中培養(yǎng)；傳代直到衰老；在衰老過程中離心以保持細胞培養(yǎng)在 30%到 60%滿；不衰老的克隆進行鑒定并傳代不少于 30 次。在軟瓊脂上沒有觀察到克隆增殖，說明這些細胞是永生化而沒有轉化。該細胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達和重組病毒生產(chǎn)的基質。
細胞特性
1） 來源：雞胚
2） 形態(tài)：成纖維細胞，貼壁生長
3） 含量：>1x10^6 細胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
5) 用途：僅供科研使用。
運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL 凍存管包裝干冰運輸，收到后-80 度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25 瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 39℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在 4 或 5X 顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各 2-3 張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在 37℃培養(yǎng)箱中放置 2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在 60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達 70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議 T25 培養(yǎng)瓶 1：2 傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備 DMEM（含 NaHCO? 1.5g/L）培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗 1%；
注意：細胞凍存后復蘇存活率只有 50% 左右，建議加大凍存密度。該細胞在DMEM（含 1.5g/L NaHCO?）培養(yǎng)基中生長良好，大部分品牌的 DMEM 含有較高濃度的NaHCO?（3.7g/L）， 若使用 DMEM（3.7g/L NaHCO?）培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞時需要提高 CO?濃度（7%-10%）。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：39℃，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1） 凍存細胞的復蘇：
將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含 4-6mL 完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含 6-8ml 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中 37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:5 的比例進行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面 T25 瓶為例；
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為 1×10^6~1 ×10^7個活細胞/ml.
2. 1000rpm 離心 3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每 1ml 凍存液含 1×10^6~1×10^7個活細胞/ml 分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80 度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項：
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。
