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人外周血 CD19+ B 細胞說明書
Human Peripheral Blood CD19+ B Cells
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貨號SD-17150
規(guī)格
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產品名稱
中文名稱：人外周血 CD19+ B 細胞
英文名稱：Human Peripheral Blood CD19+ B Cells
規(guī)格：10M
預期用途：可作為多種領域研究所需的原材料。
貯藏條件與有效期
置于液氮保存，有效期為 24 個月；
生產日期，有效期至：見標簽。
產品簡介
CD19 分子是細胞表面糖蛋白，信號轉導分子，參與調節(jié) B 細胞發(fā)育、活化和增殖。與 CD21、 CD81 組成一個大的信號轉導分子，表達在 B 細胞及其前體上，是 B 細胞系列特異性抗原中最早表達的標記。CD19 正常表達見于 B 淋巴細胞；濾泡樹突狀細胞；正常漿細胞及其前體。異常表達見于大多數急性 B 淋巴細胞白血病/淋巴瘤，但在骨髓瘤細胞，T 細胞和正常的粒細胞上無表達。美森細胞利用自有的 Flosep-C 細胞分離純化技術從外周血中純化出 CD19+B 細胞，經流式檢測，其純度大于 90%，純化后置于液氮保存。
【操作步驟】
所需試劑：
1 、IMDM，α-MEM 或 RPMI-1640
2 、FBS
3 、DNase I
操作流程：
1、 準備好 37°C 水浴，將 RPMI-1640 與 FBS 溫浴至 37°C；
2 、生物安全柜中，配制含 10% FBS 的培養(yǎng)基（IMDM, α-MEM 或 RPMI-1640 均可），待用；
3 、從液氮中取出 CD19+B 細胞凍存管，置于-80°C 超低溫冰箱中數分鐘，使凍存管中的液氮揮發(fā)，而后迅速將其置于 37°C 溫水中，并快速水平晃動，使其內含物盡快融化，直至凍存管固體內含物余下一小冰屑后取出凍存管；
注意：
1）從液氮中取出凍存管時，往往在凍存管里含有液氮，最好先將凍存管先置于超低溫冰箱中， 使液氮揮發(fā)，再進行水浴化凍的操作；
2）盡可能將凍存管的內含物全部浸沒于 37°C 溫水中，使內含物均勻融化；
3) 請勿使溫水沒過凍存管蓋的螺口，以防污染；
4) 細胞復蘇的操作過程要迅速，避免影響細胞復蘇后的活性。
5) 采用正選（Positive selection）方法分離的細胞因細胞表面標記有磁珠，故可能凍存管中細胞
顏色較深，此為正?，F象，不影響后續(xù)復蘇和使用。
4 在將凍存管拿進生物安全柜之前，用 75%酒精對其表面進行消毒；
5 輕輕重懸細胞，并將其移入裝有 100μg DNase I 的 50mL 離心管里；
注意：
1）加入 DNase I 可有效減少細胞復蘇后細胞團塊的產生；
2）DNase I 的使用是非必須的，對于 DNA, RNA 等的提取目的可不使用。
6 用 1mL 培養(yǎng)基沖洗凍存管，并將此懸液以 3-5s 每滴的速度滴加到 50mL 離心管中，并且同時輕輕搖晃離心管，使滴加的懸液混勻；
7 吸取 15-20mL 的培養(yǎng)基以 3-5s 每滴的速度滴加到 50mL 離心管中，并且同時輕輕搖晃離心管，使滴加的懸液混勻；
注意：第 5,6,7 步驟可使細胞中的 DMSO 緩慢均勻的滲透出來，最大程度保證細胞安全，但操作較為緩慢，若有多個樣品需要處理時，可以將操作步驟更改為：
5’：輕輕重懸細胞，并將其移入裝有 100μg DNase I 的 15mL 離心管里；
6’：用 1mL 培養(yǎng)基沖洗凍存管，并將此懸液合并到到 15mL 離心管里；
7’：吸取 10mL 培養(yǎng)基，直接加入到 15mL 離心管中，反復輕柔吹打或上下顛倒混勻，室溫孵育 10min；
8 室溫下，300g 離心 10min；
9 迅速使用移液槍吸走上清，剩余少許液體，并輕輕吹打液體使細胞懸?。?
注意：
1）離心結束后，盡快吸走上清；
2) 吹打液體時動作要輕，避免損傷細胞，并且吹打時盡可能避免氣泡產生。
10 緩慢加入 15-20mL 新鮮培養(yǎng)基（快速法中則只要在 15mL 離心管中加入 10mL 培養(yǎng)基即可），并同時輕輕搖晃離心管；
11 室溫下，300g 離心 10min；
注意：采用正選（Positive selection）方法分離的細胞因細胞表面標記有磁珠，故離心后管中細胞沉淀顏色較深，此為正?，F象，不影響后續(xù)使用。
12 迅速使用移液槍吸走上清，剩余少許液體，并輕輕吹打液體使細胞懸浮，此 CD19+B 細胞即可用于下游實驗。
產品性能指標
產品性能符合本企業(yè)制定的產品技術要求。
